Ninhüdriin
Ninhüdriin (2,2-dihüdroksüindaan-1,3-dioon) on väikese molekulmassiga orgaaniline aine, mida kasutatakse primaarsete amiinide ja ammoniaagi tuvastamiseks. Ninhüdriini reaktsioonil primaarse aminorühmaga moodustub intensiivse värvusega lillakassinine saadus (nn Ruhemanni lilla). Ninhüdriini värvusreaktsioon leiab kasutust nii orgaanilises sünteesis, aminohapete tuvastamisel lihtsamates proovides kui sõrmejälgede ilmutamisel.[1][2]
Aine üldised füüsikalised ja keemilised omadused
- CAS number: 485-47-2
- Brutovalem: C9H6O4
- Molekulmass: 178,14 g/mol
- Agregaatolek normaaltingimustel: tahke (valge või kollakas kristalliline pulber)
- Sulamistäpp: 250 °C (laguneb)
- Lahustuvus vees: 0,1 kuni 0,5 g 100 ml lahusti kohta 20 °C juures
- Lahustuvus orgaanilistes lahustites: lahustuv etanoolis, vähelahustuv kloroformis (triklorometaan)
Aine on kommertsiaalselt kättesaadav mitmetest firmadest.[3][4][5]
Reageerimine amiinidega
Ninhüdriin reageerib primaarseid ja eelistatult alifaatseid (st mittearomaatseid) aminorühmi sisaldavate ainetega, moodustades tumesinist või -lillakat värvi saadust. Sekundaarsete amiinidega reageerimisel tekib kollakas-oranž saadus. Sel viisil saab ninhüdriiniga reaktsiooni alusel eristada proliini (tsükliline aminohape sekundaarse aminorühmaga) teistest looduslikest aminohapetest (sisaldavad primaarseid aminorühmi). Reaktsiooniks piisab tüüpiliselt suhteliselt lahjast ninhüdriini lahusest (nt 0,5% ninhüdriini lahus etanoolis).[6][7]
Ninhüdriiniga reageerimiseks peab aminorühm olema deprotoneeritud, et toimuks nukleofiilne rünnak ninhüdriini elektrofiilsele süsinikule (tekib nn Schiffi alus). Reaktsiooni kiirendab oluliselt reaktsioonisegu kuumutamine. Näiteks tahkel faasil teostatava peptiidisünteesi puhul kuumutatakse vaik ninhüdriini etanooli lahusega ligi 100 °C juures 5 min jooksul, et tuvastada primaarsete aminorühmade olemasolu vaigul (nn Kaiseri test).[8][9][10]
Kasutamine sõrmejälgede tuvastamiseks
Ninhüdriin reageerib sõrmede rasus sisalduvate aminohapetega, võimaldades visualiseerida sõrmejälgi poorsetel pindadel (nt paberil, papil, puidul). Tingimustes, kus sõrmejälgi sisaldavat pinda ei ole võimalik kuumutada, kulgeb reaktsioon üsna aeglaselt (24 h skaalal). Seetõttu eelistatakse kohtuekspertiisis kasutada ninhüdriiniga sarnaseid aineid (ninhüdriini derivaate), nt indaan-1,2-diooni, mille puhul reaktsioon primaarsete amiinidega kulgeb kiiremini.[11][12]
Ohutusteave
Nahale või silma sattumisel põhjustab ninhüdriin ärritust ja kipitust, samuti võib tekitada hingamisteede ärritus ninhüdriini pulbri sissehingamisel. Allaneelamisel on aine toksiline (LD50 väärtus 600 mg/kg).[3][13]